La cromatografía es un método fisicoquímico de separación de especies químicas, en las que éstas se distribuyen entre dos fases no miscibles. Una de las fases es fija o estacionaria teniendo un gran área superficial, mientras que la otra, se mueve sobre la estacionaria transportando las especies a separar. Este método fue empleado por primera vez por Tswett en 1903 para separar diversos pigmentos vegetales.

En la cromatografía de capa fina, la fase estacionaria es una delgada capa de un soporte sólido granulado, tal como el silica-gel, el ac. Silícico y otros, que se depositan sobre una placa de vidrio, aluminio u otro soporte inerte. Para que adquiera firmeza y no se desmorone, la capa de fase estacionaria se aglutina con una pequeña cantidad de sulfato de calcio u otro agente cementante. Las muestras se aplican añadiendo pequeñas gotas de solución en un pequeño circulo cerca del extremo inferior de la placa. La gota se deja secar y si se desea poner más muestra se pueden aplicar más gotas, ciudando de que la mancha no se haga demasiado grande.

Se prepara previamente la cámara de separación o cubeta cromatográfica con el eluyente apropiado, hasta que la atmósfera de la cámara queda saturada con el vapor del eluyente. La placa se sumerge en el eluyente hasta una altura apxoimada de 0,5 cm. El eluyente se elige de acuerdo a la mezcla de compuestos que se quiere separar. El eluyente asciende por capilaridad, se le deja evolucionar hasta que ha recorrido unos 10 cm. desde la linea de origen. Con esta técnica se consigue que las distintas sustancias que componen la muestra sean arrastradas a velocidades diferentes, formándose bandas o zonas de sustancias. La placa desarrollada se saca de la cámara y se deja secar. Las distintas bandas se pueden revelar con reactivos, luz uv....

La separación cromatográfica se considera tanto mejor cuantas más bandas diferentes aparecen a lo largo del recorrido y cuanto más diferenciadas o separadas están las diferentes manchas entre sí. Técnicamente se diría que la separación es tanto mejor cuanta más diferencia presenten los valores de Rf. Y cuanto más estrechas sean las bandas obtenidas.

El Rf. Es un valor que oscila entre 0 y 1, y que identifica una mancha. Es el cociente obtenido al dividir la distancia que hay desde la línea de siembra hasta hasta la mancha entre la distancia recorrida por el eluyente desde la línea de siembra hasta que sacamos la placa de la cámara.
En un sistema bien caracterizado, las sustancias pueden identificarse comparando los valores de Rf con los estándares, que se han analizado previamente o durante la cromatografía.

Para ampliar la información me permito recomendarle el libro de “Cromatografía de capa fina” Enciclopedia de la Química Industrial tomo 8, Ediciones Urmo, Autor: Kurt Randerath.

Esperando que nuestras indicaciones le sean de utilidad.

Cordialmente,